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昆明市实验鼠由本校生实验动物管理中心出示


发布时间: 2019-10-18
    小白鼠精原细胞的生理学生物化学特点以及瓦解增殖、分裂、健身运动、衰退、身亡等项性命主题活动的调整体制的深入分析,精子形成原理的深化表明及其精原细胞异体、异种移殖技术性的具体运用,都急需解决寻找这种行得通的方式 将其分离纯化,以求获得较高生产量和纯净度的有魅力的精原细胞,用以离体塑造。材料说明,从成年人啮齿类的男性睾丸分离出来粗线期以及后各发育过程造精体细胞的工作中已获得可喜成绩,所获体细胞的纯净度已超出90%,生产量超过107个。但可用以离体塑造的精原细胞(小白鼠精原细胞)的分离出来却始终进度并不大。一些报导尽管纯净度很高,生产量却很低;另某些报导生产量高但纯净度低。1977年,Bellve等报导从生后8d小白鼠男性睾丸中得到了纯净度91%的a型精原细胞,生产量达2×107个。但应用的小白鼠却高达60余只,消耗了很多的实验动物。人们的项目前期已说明,小白鼠生后7~8d,其生精上皮细胞内基础只能适用体细胞和a型精原细胞,别的各个造精体细胞并未生长发育产生。在离体,适用体细胞一直先体细胞而贴壁。因而,本试验采用生后7~8d小白鼠的男性睾丸,事前**别的造精体细胞的环境污染,用组成酶消化吸收得到体细胞悬浮液,经Percoll不持续密度梯度抽滤,再用可选择性贴壁法提纯,得到了较高纯的精原细胞,基础考虑了离体塑造的必须。

 1.实验动物

 昆明市实验鼠由本校生实验动物管理中心出示,按基本方式 喂养管理方法。参考参考文献取7~8d小白鼠用以体细胞分离出来。

 2.关键实验试剂

 胶原酶IV(Sigma),透明质酸酶(Sigma),胰蛋白酶(Sigma),D-MEM(Gibco),新生儿牛血清(NBS,Gibco),Percoll(Pharmacia),胎牛血清(FBS,Gibco)。

 3.体细胞的分离出来

 分离出来液的配置:按PBS∶Percoll=1∶9的占比把寒湿**后的Percoll源液配置成90%的Percoll水溶液。用无钙、铝离子PBS,按表1列出计划方案配置Percoll各系数水溶液。

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