细胞冻存：人肌肤磷肿瘤细胞SCL-1塑造常见问题!

体细胞传代：人肌肤磷肿瘤细胞SCL-1塑造常见问题

1）体细胞生长发育至遮盖塑造瓶的80%总面积时，弃25cm2塑造瓶中的细胞培养液，用PBS清理体细胞一回；

2）加上0.25%胰蛋白酶消化酶约1ml至塑造瓶中，倒置显微镜下观查，待体细胞收缩变圆后添加彻底细胞培养液停止消化吸收，再轻轻地吹打体细胞使之掉下来，随后将悬液迁移至15ml离心管中，1000rpm抽滤5min；

3）弃上清，沉定体细胞用12ml彻底培养液重悬，随后按1:2占比开展分瓶传代，*后放进37℃，5%CO2细胞培养箱中塑造；

4）待体细胞彻底贴壁后，观查塑造結果，以后开展换液塑造或传代。

细胞冻存：人肌肤磷肿瘤细胞SCL-1塑造常见问题

1）体细胞生长发育至遮盖塑造瓶的80%总面积时，弃25cm2塑造瓶中的细胞培养液，用PBS清理体细胞一回；

2）加上0.25%胰蛋白酶消化酶约1ml至塑造瓶中，倒置显微镜下观查，待体细胞收缩变圆后添加彻底细胞培养液停止消化吸收，轻轻地吹打体细胞使之掉下来，随后将悬液迁移至15ml离心管中，1000rpm抽滤5min；

3）用适当的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬体细胞，并置放于冻银行存管中；

4）先将细胞冻存管置放于-20℃ 1.5h，随后将其移进-80℃留宿，24h后转到液态氮中开展长期性储存。应用程序流程减温盒可立即放进-80℃。体****：人肌肤磷肿瘤细胞SCL-1塑造常见问题

1）从液态氮中取下细胞冻存管（留意：配戴防爆管痛苦面具），迅速将其嵌入37℃水浴中解除冻结，直到冻银行存管中无结晶体，随后用75%的乙醇擦洗冻银行存管表面；

2）将冻银行存管中的体细胞挪到含5ml彻底培养液的15ml离心管中， 1000rpm抽滤5min；

3）弃上清，沉定用5ml彻底培养液重悬，打疫苗25cm2塑造瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中塑造；

4）隔天，改用新鮮彻底养基再次塑造。

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