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细胞冻存:人肌肤磷肿瘤细胞SCL-1塑造常见问题!


发布时间: 2019-10-18
    体细胞传代:人肌肤磷肿瘤细胞SCL-1塑造常见问题

 1)体细胞生长发育至遮盖塑造瓶的80%总面积时,弃25cm2塑造瓶中的细胞培养液,用PBS清理体细胞一回;

 2)加上0.25%胰蛋白酶消化酶约1ml至塑造瓶中,倒置显微镜下观查,待体细胞收缩变圆后添加彻底细胞培养液停止消化吸收,再轻轻地吹打体细胞使之掉下来,随后将悬液迁移至15ml离心管中,1000rpm抽滤5min;

 3)弃上清,沉定体细胞用12ml彻底培养液重悬,随后按1:2占比开展分瓶传代,*后放进37℃,5%CO2细胞培养箱中塑造;

 4)待体细胞彻底贴壁后,观查塑造結果,以后开展换液塑造或传代。

 细胞冻存:人肌肤磷肿瘤细胞SCL-1塑造常见问题

 1)体细胞生长发育至遮盖塑造瓶的80%总面积时,弃25cm2塑造瓶中的细胞培养液,用PBS清理体细胞一回;

 2)加上0.25%胰蛋白酶消化酶约1ml至塑造瓶中,倒置显微镜下观查,待体细胞收缩变圆后添加彻底细胞培养液停止消化吸收,轻轻地吹打体细胞使之掉下来,随后将悬液迁移至15ml离心管中,1000rpm抽滤5min;

 3)用适当的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬体细胞,并置放于冻银行存管中;

 4)先将细胞冻存管置放于-20℃ 1.5h,随后将其移进-80℃留宿,24h后转到液态氮中开展长期性储存。应用程序流程减温盒可立即放进-80℃。 体****:人肌肤磷肿瘤细胞SCL-1塑造常见问题

 1)从液态氮中取下细胞冻存管(留意:配戴防爆管痛苦面具),迅速将其嵌入37℃水浴中解除冻结,直到冻银行存管中无结晶体,随后用75%的乙醇擦洗冻银行存管表面;

 2)将冻银行存管中的体细胞挪到含5ml彻底培养液的15ml离心管中, 1000rpm抽滤5min;

 3)弃上清,沉定用5ml彻底培养液重悬,打疫苗25cm2塑造瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中塑造;

  4)隔天,改用新鮮彻底养基再次塑造。

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