主营产品:

小鼠肺细胞,仓鼠体细胞,小鼠神经细胞,小鼠脑细胞,小鼠**细胞,仓鼠细胞,兔肝细胞,兔上皮细胞,兔胰岛细胞,猪上皮细胞

公司新闻

将培养皿在塑造箱里置放 2 h 左右,至体细胞打疫苗


发布时间: 2019-10-18
   丘脑颗粒细胞试验方式基本原理将 4~8 只新生儿鼠的丘脑切割成小立方米块,放进 HBSS,在 37°C 标准下要胰蛋白酶消化吸收 15 min。将体细胞打疫苗于有涂 L-多聚赖氨酸的培养皿或塑造瓶。

 试验原材料DMEMHBSSL-多聚赖氨酸阿糖胞苷0.025% 胰蛋白酶硅酮

 仪器设备、耗品P e tr i培养皿解剖刀解剖学剪解剖学镊Pasteur塑料吸管10ml塑料吸管试管婴儿水浴箱

 丘脑颗粒细胞试验流程

 1. 在无菌检测标准下摘除丘脑,放进 HBSS(带有 3 g/L BSA)。

 2. 用解剖刀将脑部切割成约 0.5 mm3 尺寸的正方体。

 3. 将机构块移进 12 ml 试管婴儿,用 HBSS 洗 3 次。每一次清洗后让机构块沉在试管婴儿底端。

 4. 添加 10 ml 用 HBSS 配置的 0.025 % 胰蛋白酶(用 HBSS 配置),在 37°C 标准下要水浴箱孵育 15 min。

 5. 将胰蛋白酶消化吸收的脑部移进 50 ml 离心管,随后添加 20 ml 生长发育细胞培养液,以停止胰蛋白酶的消化吸收功效。

 6. 根据用硅化的 Pasteur 塑料吸管碾磨使机构分散化,直到得到单细胞悬浮液。

 硅化 Pasteur 塑料吸管:

 (a)用双蒸水将硅酮液稀释液为 0.1%~1%;

 (b)将塑料吸管浸人硅酮液或用硅酮液清洗塑料吸管板内面;

 (c)置放 24 h 晾晒或在 100°C 标准下置放十多分钟使塑料吸管变干;

 (d)将塑料吸管干热**。

 用 L-多聚赖氨酸解决培养皿:

 (a)用双蒸水融解 L-多聚赖氨酸(10 mg/L);

 (b)将化合物过滤**;

 (c)每一 35 mm Petri 培养皿内添加 1 ml L-多聚赖氨酸液;

 (d)10~15 min 后吸出来 L-多聚赖氨酸液,添加 1~15 ml 细胞培养液;

 (e)将培养皿在塑造箱里置放 2 h 左右,至体细胞打疫苗。

 7. 将盛满体细胞悬浮液的离心管放 3~5 min,让小的机构团块沉在试管婴儿底。随后,用 Pasteur 塑料吸管吸出来机构团块。

 8. 将单细胞悬浮液抽滤(200 g ,5 min ) 后,吸出来上清液。

 9. 用生长发育细胞培养液混悬体细胞团,随后打疫苗体细胞,每一培养皿的体细胞相对密度为 2.5×106~3.0×106 个。

 10. 塑造 2~4 d 后(二天后*佳),添加 5~10 μmol/L 阿糖胞苷,再次塑造 24 h。

  11. 用 DMEM (带有 30 mmol/L 果糖、2 mmol/L 谷氨酰胺、24.5 mmol/L 氯化钾、100 mU/L 甘精胰岛素(Sigma,Ⅰ-1882)、7  μmol/L 对氨基苯甲酸(Sigma,A -3659)、100  μg/ml 庆大霉素和 10 % 加温消灭的 FCS)换液。

Copyright@ 2003-2019  上海斯信生物科技有限公司  版权所有  



合作单位





















         沪ICP备17033327号-1   

沪公网安备 31011202007337号