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人胚胎干细胞H9无喂养层塑造方式


发布时间: 2019-09-20
  人胚胎干细胞H9无喂养层塑造方式

 使用手册

 体细胞名字 H9 Feeder Free 人胚胎干细胞H9 无喂养层

 货号 0692

 种属 人

 机构来源于 人试管胚胎内体细胞团

 形状 球型复制

 生长发育方法 贴壁

 安全系数 全部恶性肿瘤和病毒感染转染的体细胞均视作有潜在性的微生物不佳影响,务必在2级院内感染台内实际操作,并温馨提醒安全防护

   塑造 彻底细胞培养液: mTeSR1 人ES/iPS 体细胞无喂养层彻底塑造试剂盒(Stem cell, 货号85850)

 传代消化酶:柔和分离出来体细胞实验试剂(Stem cell, 货号07174)

 冻存液:无血细胞无小动物成份细胞冻存液(Stem cell, 货号07930)

 栽培基质胶:hES 专用型栽培基质胶(BD,货号354277)

 溫度:37℃

 溫度:37℃  液相:95%气体,5%CO2

 传代 接到体细胞后,请对细胞培养瓶表面开展****,将体细胞放置恒温箱中开展 1-2 钟头的缓存,待体细胞修复基础生长发育情况后,开展事件体细胞试验。

 在倒置显微镜下观查全部体细胞生长发育状况:人胚胎干细胞H9无喂养层塑造方式

 (一)体细胞未长至 85%时,用 75%乙醇喷撒全部瓶****后放进微生物工作台内,严苛无菌操作,开启细胞培养瓶,若塑造瓶上无独特标明,吸掉剩下细胞培养液,只留 6-8ml细胞培养液再次塑造。

 (二)体细胞已爬满(达 85-95%)。就能开展传代,操作步骤给出:

 1.弃去细胞培养液,用 PBS 清洗 1-2 次,

 2.添加 1.0ml 胰酶消化酶,37℃消化吸收,光学显微镜下观查体细胞消化吸收状况,若体细胞收缩变圆、晶莹剔透、轻轻拍打甁壁呈流砂样掉下来,则快速拿回工作台,添加二倍的含 10%血细胞的彻底细胞培养液,停止消化吸收并轻轻地吹打体细胞,使其变为单细胞悬浮液,

 3.将体细胞搜集于离心管中抽滤 1000rmp/5min,弃上清,轻弹管底,将体细胞弹散,

 4.添加新鮮细胞培养液重悬体细胞,开展传代、冻存,

 5.如果不是非常表明,提议接到体细胞后的次传代占比为 1:2。

 注:1.观查体细胞相对密度用(4X物镜)高倍镜观查,便于恰当的分辨体细胞相对密度;观查体细胞形状请使用(10X 或 20X)低倍镜观查;

 2.瓶中运送的细胞培养液不可以多次重复使用,请换新鮮细胞培养液塑造;

 3.一些体细胞贴壁不稳固,如发觉贴壁细胞有掉下来,可抽滤重悬后打疫苗到新瓶里;

 4.接到体细胞后,若发觉塑造瓶损坏、液漏及体细胞环境污染,请立即与人们联络。

 储存 冻存标准:70%基本细胞培养液+20%胎牛血清+10%DMSO 

 储存标准:液态氮储存

 供货限定 仅作科学研究的用法

 常见故障 1.塑造瓶有裂开,细胞培养液有液漏:体细胞巨大将会会环境污染,因此人们会立即分配帮教师解决方法 处理。

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