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人滑膜体细胞试验方式基本原理!!


发布时间: 2019-09-20
  人滑膜体细胞试验方式基本原理

 将人滑膜从人体中取下,经胰酶、螯合剂(常见EDTA)解决,分散化成单细胞,置α-MEM生长发育培养液中塑造,使体细胞足以存活、生长发育和繁育。

 试验原材料滑膜机构

 实验试剂、试剂盒Ⅰ型胶原酶胎牛血清盐水PBS

 仪器设备、耗品超净台解剖学剪滤网离心管计算板塑造瓶

 人滑膜体细胞试验流程

 一、试验原材料提前准备

 1.   滑膜机构:将手术切下来的机构在手术台请护理人员将标本采集放进超低温盐水中,在手术**完工了将标本采集放进PBS凉水液中并放进****的器皿中带到试验室。

 2.   实验试剂:4 mg/mlⅠ型胶原酶(α-MEM配置),细胞培养液(含10%胎牛血清的α-MEM)。

 3.   器材:手术室器械。

 二、方式

 1.   将切下来的机构在手术台请护理人员将标本采集放进超低温盐水中(静止不动),在手术**完工了将标本采集放进PBS凉水液中并放进****的器皿中带到试验室。

 2.  在超净台上将标本采集放进培养皿中,添加α-MEM清洗。

 3.  得到机构割开,细心分辨于骨节反折处及增长的乳白色光洁的滑膜机构,附在关节软骨面的增长的****翳也为滑膜机构(能作另一个管消化吸收),细心去除脂肪细胞,用α-MEM洗再次(以除去血细胞),放到小青瓶连用解剖学剪锐性剁碎。

 4.   用二倍得到机构的容积带有4 mg/mlⅠ型胶原酶的α-MEM消化吸收37℃孵育120分鐘(在这段时间振动搅拌多次)。

 5.   30分鐘后搜集管体细胞:体细胞悬浮液经70 um体细胞过滤网过虑,用1500-2000转抽滤6分鐘,上清为Ⅰ型胶原酶添加未滤网的机构,再次用以消化吸收。

 6.   离心管底体细胞用α-MEM抽滤清洗2次,每一次用α-MEM重飘浮完用1500-2000转,抽滤6分鐘,*后一回用计算板观查到有体细胞。体细胞*终飘浮于带有10%胎牛血清的α-MEM中,打疫苗到塑造瓶中塑造。

 7.  60钟后搜集其次管体细胞:体细胞悬浮液经70 um体细胞过滤网过虑,用1500-2000 rpm抽滤6分鐘;用α-MEM洗2次,每一次用α-MEM重飘浮完用1500-2000 rpm抽滤6分鐘,*后一回用计算板观查体细胞并记数。体细胞*终飘浮于α-MEM带有10%胎牛血清中,打疫苗到塑造瓶中塑造。

 8.   必需时可做*后管体细胞搜集;并马上作原代滑膜细胞培养。

 9.  每2-3天换液一回。

 常见问题

 1.  全培用α-MEM或RPMI1640或DMEM,加10%胎牛血清。不可以用小牛血清,胎牛血清用国内就能;

 2.  务必用Ca2+-free的PBS。

 别的

 人滑膜体细胞试验原材料提前准备

 1.   滑膜机构:将手术切下来的机构在手术台请护理人员将标本采集放进超低温盐水中,在手术**完工了将标本采集放进PBS凉水液中并放进****的器皿中带到试验室。

 2.   实验试剂:4 mg/mlⅠ型胶原酶(α-MEM配置),细胞培养液(含10%胎牛血清的α-MEM)。

  3.   器材:手术室器械。

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