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**荧光标记技术!


发布时间: 2019-09-20
 **荧光标记技术(immunofluorescence technique)是将己知的抗原或抗原分子结构标识上荧光素,当两者之间相对性应的抗原或抗原起反映时,在产生的复合物上就含有足量的荧光素,在光学显微镜下就能够看到传出莹光的抗原和抗体结合部位,检验出抗原或抗原。

 试验方式基本原理**荧光标记技术(immunofluorescence technique)是将己知的抗原或抗原分子结构标识上荧光素,当两者之间相对性应的抗原或抗原起反映时,在产生的复合物上就含有足量的荧光素,在光学显微镜下就能够看到传出莹光的抗原和抗体结合部位,检验出抗原或抗原。

 试验原材料飘浮体细胞

 实验试剂、试剂盒多聚-L-赖氨酸

 仪器设备、耗品离心脱水机恒温箱

 飘浮体细胞试验流程

 1.  体细胞在冰浴中水冷却,随后用台式离心机于4℃以800 g 抽滤5 min,吸掉细胞培养液并且以4℃PBS重悬体细胞。

 2.  抽滤吸掉PBS,以1~2 ml 2%PFA固定不动液,或2%PFA固定不动液/0.1% Triton X-100重悬体细胞,置雪上固定不动30 min。

 3.  抽滤、吸掉固定不动液,用15 ml 4℃ PBS重悬体细胞,放5 min 后,用PBS再度清洗体细胞。

 4.  稀释液的抗原于4℃用微量分析离心脱水机以13 500 g 抽滤2 min,250 μl 抗原充足用以5×106体细胞。

 5.  抽滤体细胞,吸掉PBS,重悬体细胞于抗原中,置4℃温育1 h。

 6.  用4℃ PBS稀释液体细胞和抗原至15 ml。

 7.  抽滤,吸掉PBS,以4℃ PBS重悬体细胞,反复1次。

 8.  其次抗原4℃用微量分析离心脱水机以13 500 g 抽滤2 min,5×106体细胞用250 μl 抗原充足。

 9.  吸掉PBS,以其次抗原重悬体细胞,4℃温育1 h,反复流程6及流程7。

 10.  除非是马上观查体细胞,不然在开展体细胞萃取的下一阶段实际操作以前要以铝萡包囊离心管并冷冻。

 11.  抽滤体细胞并且以小量PBS重悬(勿自来水),将体细胞悬液体于多聚-L-赖氨酸覆层的载玻片上,再加盖玻片,尽量立刻观查結果。

 收拢 

 常见问题

 1、莹光染色剂后通常在1h内进行观查,或于4℃储存4h,時间太长,将会会使莹光提早衰落。

 2、每一次实验均需设定下列几种对比:

 (1) 阳性对照:阳型血细胞+莹光标识物;

 (2) 呈阴性对比:呈阴性血细胞+莹光标识物;

    (3) 莹光标识物对比:PBS+莹光标识物。

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