上皮细胞类营造实验方法基本概念

上皮细胞类营造实验方法基本概念

    有益于皮肤表皮细胞培养获得成功的因素有，在有胶原蛋白粉的底物上易发肓；另人们发现把人或实验鼠表皮细胞培养在以3T3 身体细胞为饲养层（用射线照射后）处时，身体细胞易发肓并可造成务必水准的瓦解情况。降低pH、Ca2+的水分含量和温度等，均有益于表皮身体细胞发肓。向细胞培养液中放（ 10 μg/ml ）、10-10 的霍乱毒素累积、10M-6 的异丙基肾上腺激素（Isopro-terenol）和10 ng/mI 促细胞生长因子（EGF）能促表皮身体细胞发肓。

上皮细胞类营造实验原料

   皮肤红细胞样品、试剂盒    EDTA胰蛋白酶Eagle实验仪器、耗品    血管钳一次性吸管CO2温箱实验步骤    皮肤是皮表细胞培养来自，小儿包皮是皮肤表皮细胞培养的好原料。全皮营造时，表皮身体细胞与成纤维细胞混合发肓，没法纯化。黑木登志夫（1981）用皮肤表皮和***提取塑造法必得纯上皮细胞，有务必实际意义，其法得出：

  1.  抽样取胃肠外科植皮或做手术残余皮肤一片片，以角化层薄者为宜，早产婴儿小产儿皮肤更强，切成 0.5~1 CM一片片；

  2.  EDTA处理先置入0.02 %EDTA 中室温置5 分钟；

  3.  冷消化换入0.25 %胰蛋白酶中，置4 ℃借宿；

  4.  提取取出皮块，用血管钳或尖嘴钳把表皮与表皮分离出来；

  5.  温消化取出表皮单独处理，用剪刀裁成更小的块后，置入新的0.25 %胰蛋白酶中，37 ℃再消化30~60 分钟；

  6.  用一次性吸管缓缓的持续吹打，使成身体细胞混液；

  7.  细胞培养液依据80 目不锈钢板材防晒网滤过后，低速档抽滤，吸上清，马上加上Eagle液和 20 %小牛血清，制成身体细胞混液，加入入碟皿中，CO2温箱营造。收缩

常见故障

   冷消化目的在于使表皮和***结合松散，如冷消化后提取出去的表皮膜自身也已松散，这时候还可以马上置入PBS省略一次性吸管吹打制得身体细胞混液；不再经历再度消化。

    其他皮肤表皮营造还可以用全皮消化法或组织块塑造法营造。用胶原酶消化为好，它对结蹄有较强消化作用，对表皮身体细胞危害小，但成纤维细胞易与上皮细胞一块儿发肓，在这种事情下，必须消除成合成纤维胞处理。红细胞中含有红细胞来自的细胞生长因子（PDGF），易促进纤维细胞的发肓；如用好的、可含PDGF的无血细胞培养液营造将会更强。

上一篇：免疫荧光标记技术！
下一篇：支原体无细胞壁(cell wall)

本公司网站所展示销售的产品仅供科研！

上皮细胞类营造实验方法 基本概念

上皮细胞类营造实验方法基本概念