糖类抗原125(CA125)ELISA试剂技术原理与操作流程详述

糖类抗原125(CA125)ELISA试剂技术原理：
（1）. 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
（2）. 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。
（3）. 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
（4）. 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。
（5）. 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
（6）. 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重复性好。以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
糖类抗原125(CA125)ELISA试剂盒操作流程：
1. 糖类抗原125(CA125)ELISA试剂盒从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

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