人子宫颈癌培养条件: 培养基:DMEM/F12+1%N2+2%B27 气相:空气,95%;二氧化碳,5% 温度:37摄氏度 人子宫颈癌细胞描述: 细胞描述:本公司培养出品的神经干细胞(NPC)取自12天C57小鼠胚胎的端脑,用DMEM/F12+1%N2+2%B27完全培养基进行原代培养和传代。 细胞生长:神经干细胞悬浮成“神经球”生长。 细胞规格:1ml冻存管(1x106)或者1个25cm2的培养瓶。 细胞活力:>90%推荐阅读:传代细胞培养 细胞代数:P2~P3 细胞检测:细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。 细胞传代: 1.显微镜下观察细胞,神经干细胞悬浮成“神经球”生长,通常情况下,每两天换液一次,每四天传代一次。 2.在生物**柜或者超净台中,将培养瓶中的含有神经球的培养基转移到15ml离心管中。 3.500rpm离心5分钟,收集神经干细胞。 4.加入1ml0.125%含有EDTA的胰酶,在超净工作台中轻轻吹打10次,注意不要消化太久,消化的目的是缩小神经球的体积,不要消化能单个神经干细胞,那样会影响其生长速度。 5.然后加入5ml培养基,吹打均匀后1000rpm离心5分钟。 6.离心后,去掉上清,用新鲜培养基重悬细胞,按照1:2-1:3的比例进行细胞传代培养。 人子宫颈癌细胞复苏: 1.取出冻存管后,投入37℃水浴中,震荡解冻2min。 2.酒精消毒管壁外侧后,将其转入超净台中,将管内细胞转移至离心管中,加入5ml37℃预热的DMEM/F12+10%FBS培养基。 3.将离心管离心(1000rpm,5min)。 4.弃去上清,再加入2mlDMEM/F12+1%N2+2%B27完全培养基,转入培养瓶中培养。 细胞冻存:液氮冻存(冻存液:DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO)。 细胞运输:干冰运输(冻存管)/常温运输(T-25培养瓶) 细胞鉴定:神经干细胞采用nestin免疫荧光染色鉴定。左图是白光视野中的“神经球”形态,放大倍数为200x,右图为nestin染色后的荧光图片(绿色),放大倍数为200x。
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