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e14细胞

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产品名称: e14细胞
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发布时间:2018-06-20

简单介绍

e14细胞


e14细胞  的详细介绍

 小鼠胚胎干细胞 (E14)

细胞特性
1)来源:小鼠,胚胎内细胞团
2)形态:球形克隆
3)含量:>lxl06 个/mL
4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格:T25瓶或者lmL冻存管包装
细胞接受后的处理:
1.收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的完全培养基。
4.如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附 带的完全培养基。
5.接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我 们取得联系。
细胞用途:仅供科研使用。
本公司的细胞培养操作规程,供参考
1)培养基及培养冻存条件准备:
1.mES 完全培养液配方(600 ml): DMEM (Invitrogen 12430) 497 ml,ES 级 FBS
(biochrom S4115) 90 ml, Glutamax (Invitrogen 35050) 6 ml , NEAA (Invitrogen 11140)6ml,UF(MilliporeESG1107)6〇yl (终浓度为 1000U/ml),0-Mer (Invitrogen 21985) 1.5 ml〇
2. 培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37°C,培养箱湿度 为 70%-80%。
3.冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2)细胞处理:
复苏细胞:将含有lmL细胞悬液的冻存管迅速放入37°C水浴中(水面要低 于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心 管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入lmL培 养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。 第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
力口 2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37°C培
养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部 分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的 培养基终止消化。
轻轻吹打后吸出,移入15ml离心管中,在1000RPM条件下离心4分钟, 弃去上清液,加入lmL培养液后吹匀。
移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养 基的T-75培养瓶中培养。
细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,先 要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行, 蕞后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心,用血清重悬浮,加DMSO 至蕞终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每lml的数量分配到冻存管 中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
注意事项:
收到细胞后,若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染, 请立即与我们联系。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作, 并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
 
 
 
 
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