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实验方法原理常用于研究膜脂流动性
膜结构中的蛋白质和脂质具有相对侧向流动性;细胞膜是由磷脂双分子层和镶嵌、贯穿在其中及吸附在其表面的蛋白质组成的,磷脂双分子层疏水的尾部在内,亲水头部在外。
实验方法原理常用于研究膜脂流动性的荧光探针为1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)。DPH掺入到细胞膜脂烃链区后,介质粘度增加,顺反异构受到抑制,成为能发光的全反构型。
实验材料肿瘤细胞
试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液DPH
仪器、耗材荧光分光光度计离心机
实验步骤
1. 取对数生长期的肿瘤细胞,以pH7.2,0.01 mol/l 磷酸盐缓冲液洗涤两次。
2. 取107个细胞,离心,加入2×106 mol/l DPH溶液2 ml。
3. 25℃振荡温育30 min,再以PBS洗涤1次。
4. 悬浮于4 ml PBS溶液中。
5. 测定仪器为荧光分光光度计,在激发波长362 nm,发射波长432 nm,狭缝10条件下测定荧光强度。
注意事项
由于DPH可进入细胞内部,后来又合成了其阳性离子衍生物1-(4-**胺苯基)-6-苯基-1,3,5-己三烯(TMDPH)。TMDPH不能透过细胞膜进入细胞,因此,理论上TMDPH标记法较DPH标记法更能准确的反映膜脂流动性。
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