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储存标准:液态氮储存!
人胚胎干细胞H9无喂养层塑造方式
使用手册
体细胞名字 H9 Feeder Free 人胚胎干细胞H9 无喂养层
货号 0692
种属 人
机构来源于 人试管胚胎内体细胞团
形状 球型复制
生长发育方法 贴壁
**系数 全部恶性肿瘤和病毒感染转染的体细胞均视作有潜在性的微生物**影响,务必在2级院内感染台内实际操作,并温馨提醒**防护
塑造 彻底细胞培养液: mTeSR1 人ES/iPS 体细胞无喂养层彻底塑造试剂盒(Stem cell, 货号85850)
传代消化酶:柔和分离出来体细胞实验试剂(Stem cell, 货号07174)
冻存液:无血细胞无小动物成份细胞冻存液(Stem cell, 货号07930)
栽培基质胶:hES 专用型栽培基质胶(BD,货号354277)
溫度:37℃
溫度:37℃ 液相:95%气体,5%CO2
传代 接到体细胞后,请对细胞培养瓶表面开展消毒杀菌,将体细胞放置恒温箱中开展 1-2 钟头的缓存,待体细胞修复基础生长发育情况后,开展事件体细胞试验。
在倒置显微镜下观查全部体细胞生长发育状况:人胚胎干细胞H9无喂养层塑造方式
(一)体细胞未长至 85%时,用 75%乙醇喷撒全部瓶消毒杀菌后放进微生物工作台内,严苛无菌操作,开启细胞培养瓶,若塑造瓶上无独特标明,吸掉剩下细胞培养液,只留 6-8ml细胞培养液再次塑造。
(二)体细胞已爬满(达 85-95%)。就能开展传代,操作步骤给出:
1.弃去细胞培养液,用 PBS 清洗 1-2 次,
2.添加 1.0ml 胰酶消化酶,37℃消化吸收,光学显微镜下观查体细胞消化吸收状况,若体细胞收缩变圆、晶莹剔透、轻轻拍打甁壁呈流砂样掉下来,则快速拿回工作台,添加二倍的含 10%血细胞的彻底细胞培养液,停止消化吸收并轻轻地吹打体细胞,使其变为单细胞悬浮液,
3.将体细胞搜集于离心管中抽滤 1000rmp/5min,弃上清,轻弹管底,将体细胞弹散,
4.添加新鮮细胞培养液重悬体细胞,开展传代、冻存,
5.如果不是非常表明,提议接到体细胞后的次传代占比为 1:2。
注:1.观查体细胞相对密度用(4X物镜)高倍镜观查,便于恰当的分辨体细胞相对密度;观查体细胞形状请使用(10X 或 20X)低倍镜观查;
2.瓶中运送的细胞培养液不可以多次重复使用,请换新鮮细胞培养液塑造;
3.一些体细胞贴壁不稳固,如发觉贴壁细胞有掉下来,可抽滤重悬
后打疫苗到新瓶里;
4.接到体细胞后,若发觉塑造瓶损坏、液漏及体细胞环境污染,请立即与人们联络。
储存 冻存标准:70%基本细胞培养液+20%胎牛血清+10%DMSO
储存标准:液态氮储存
供货限定 仅作科学研究的用法
常见故障 1.塑造瓶有裂开,细胞培养液有液漏:体细胞巨大将会会环境污染,因此人们会立即分配帮教师解决方法 处理。
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