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鳞状上皮细胞类塑造试验方式基本原理

 鳞状上皮细胞类塑造试验方式基本原理    

    有利于肌肤外皮细胞培养取得成功的要素有,在有胶原蛋白的底物上易生长发育;另许多人发觉把人或小白鼠外皮细胞培养在以3T3 体细胞为喂养层(用放射线直射后)处时,体细胞易生长发育并可产生必须水平的分裂状况。减少pH、Ca2+的含水量和溫度等,均有利于外皮体细胞生长发育。向培养液里加( 10 μg/ml )、10-10 的霍乱内毒素、10M-6 的异丙基肾上腺激素(Isopro-terenol)和10 ng/mI 促细胞生长因子(EGF)能促外皮体细胞生长发育。

鳞状上皮细胞类塑造试验原材料    

   肌肤血细胞实验试剂、试剂盒    EDTA胰蛋白酶Eagle仪器设备、耗品    血管钳塑料吸管CO2温箱试验流程    肌肤是皮表细胞培养来源于,小儿包皮是肌肤外皮细胞培养的好原材料。全皮塑造时,外皮体细胞与成纤维细胞混和生长发育,无法提纯。黑木登志夫(1981)用肌肤外皮和牛皮分离出来塑造法可得纯鳞状上皮细胞,有必须实用价值,其法给出:

  1.  取样取普外植皮或手术治疗残留肌肤一块块,以角化层薄者为宜,早产儿小产儿肌肤更强,切割成 0.5~1 CM一块块;

  2.  EDTA解决先嵌入0.02 %EDTA 中室内温度置5 分鐘;

  3.  冷消化吸收换入0.25 %胰蛋白酶中,置4 ℃留宿;

  4.  分离出来取下皮块,用血管钳或钳子把外皮与表皮层分离;

  5.  温消化吸收取下外皮独立解决,用剪子裁成更小的块后,嵌入新的0.25 %胰蛋白酶中,37 ℃再消化吸收30~60 分鐘;

  6.  用塑料吸管轻轻地不断吹打,使成体细胞悬浮液;

  7.  细胞培养液根据80 目不锈钢板遮阳网滤过后,低速档抽滤,吸上清,立即添加Eagle液和 20 %小牛血清,做成体细胞悬浮液,打疫苗入碟皿中,CO2温箱塑造。 收拢 

常见问题    

   冷消化吸收目地取决于使外皮和牛皮融合疏松,如冷消化吸收后分离出来出来的外皮膜本身也已疏松,这时也可以立即嵌入PBS连用塑料吸管吹打制取体细胞悬浮液;已不历经再次消化吸收。

别的 

   肌肤外皮塑造也可以用全皮消化吸收法或机构块塑造法塑造。用胶原酶消化吸收为好,它对结蹄有较强消化吸收功效,对外皮体细胞损害小,但成纤维细胞易与鳞状上皮细胞一起生长发育,在这种情况下,需要清除成化学纤维胞解决。血细胞中带有血细胞来源于的细胞生长因子(PDGF),易促使纤维细胞的生长发育;如用好的、没有PDGF的无血细胞培养液塑造将会更强。

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