鸡胚成纤维细胞试验方式基本原理

  鸡胚成纤维细胞试验方式基本原理

用鸡胚制取塑造鸡胚成纤维细胞。

试验原材料    9 日龄鸡胚

实验试剂、试剂盒    70% 酒精胰酶／EDTA不含防腐剂 MEM 培养液彻底 MEM-10 培养液

仪器设备、耗品    无菌检测解剖学剪无菌检测钳子100 cm2 无菌检测培养皿10 ml 注射针无菌检测胰酶消化吸收瓶（带磁力搅拌棒）CO2 恒温箱500 ml 量杯沙布 Sorvall 离心脱水机250 ml 离心管150 cm2 组织培养瓶

鸡胚成纤维细胞试验流程

1. 将 10 只 9 周龄鸡胚有气体一部分朝上置放，喷完 70% 酒精。

2. 用无菌检测的解剖学剪将生鸡蛋的顶端开启，剪去膜上像蛋壳，使膜维持详细。用无菌检测钳子将膜拿掉。别的生鸡蛋亦反复同样实际操作。

3. 取下鸡胚，放进无菌检测的 100 cm2 培养皿。

4. 剪去每一鸡胚的头和足，将剩下的人体放进无菌检测的 100 cm2 培养皿中，添加 10 ml 无防腐剂的 MEM 培养液。根据 10 ml 注射针（5 个鸡胚/注射针）挤压成型，将鸡胚剁碎并打架无菌检测的胰酶消化吸收瓶中。

5. 添加 100 ml 37℃ 的胰酶/EDTA，并在增湿器的 5% CO2 恒温箱中 37℃ 不断拌和温育 5 min。

6. 将液體从无菌检测胰酶消化吸收瓶中倒人杯口带双层沙布的 500 ml 量杯，将过虑后的液體迁移至 250 ml 抽滤瓶中。

7. 向带有剩下机构的无菌检测胰酶消化吸收瓶中添加 100 ml 新鮮的胰酶/EDTA，37℃ 温育。

8. 将消化酶倒进另外杯口带双层沙布的 500 ml 量杯，并将过虑后的液體添加此前的 250 ml 抽滤瓶中。

9. 在 Sorvall RC-3B 离心脱水机中，4℃，1200 g 抽滤 10 min。

10. 丢掉上清，添加 10 ml MEM-10 彻底培养液，不断抽食 10～15 次重悬沉定，并将容积调节至 100 ml。

11. 将悬液迁移至 250 ml 抽滤瓶中，4℃，1200 g 抽滤 10 min。

12. 用 5 ml MEM-10 彻底培养液重悬沉定，并将容积调节至 30 ml。

13. 将体细胞悬浮液按一瓶 1 ml 添加到 30 个带有 30 ml MEM-10 彻底培养液的 150 cm2 组织培养瓶中。

14. 37℃ 塑造几日直到体细胞爬满，随后将塑造瓶迁移至增湿器的 5% CO2 恒温箱中 31℃ 储存。

   CEF 细胞培养液可以在 31℃ 储存 2～3 个礼拜。原代的 CEF 体细胞也可以立即用以病毒感染生长发育，或将胰酶解决后的 CEF 细胞冻存在液态氮中留之后应用。

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