细胞如何传代

细胞传代：

    收到细胞后，请对细胞培养瓶外表进行消毒，将细胞置于培养箱中进行 1-2 小时的缓冲，待细胞恢复基本生长状态后，进行后续细胞实验。在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

  （一）细胞未长至 85%时，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，若培养瓶上无特殊标注，吸去剩余培养液，只留 6-8ml培养液继续培养。

  （二）细胞已长满（达 85-95%）。即可进行传代，具体步骤如下：

   1.弃去培养液，用 PBS 洗涤 1-2 次，

   2.加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化，显微镜下观察细胞消化情况，若细胞回缩变圆、透亮、轻拍甁壁呈流沙样脱落，则迅速拿回操作台，加入双倍的含 10%血清的完全培养液，终止消化并轻轻吹打细胞，使其变成单细胞悬液，

   3.将细胞收集于离心管中离心 1000rmp/5min，弃上清，轻弹管底，将细胞弹散，

   4.加入新鲜培养液重悬细胞，进行传代、冻存，

   5.如果没有特别说明，建议收到细胞后的次传代比例为 1:2。

    注：1.观察细胞密度用（4X物镜）低倍镜观察，以便正确的判断细胞密度；观察细胞形态请用（10X 或 20X）高倍镜观察；

   2.瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养；

   3.有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心重悬后接种到新瓶内；

   4.收到细胞后，若发现培养瓶破损、漏液及细胞污染，请及时与我们联系。

常见问题及解决方案：

   1.培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。