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糖原合成酶激酶(GSK)ELISA试剂盒的检测原理与操作步骤

    糖原合成酶激酶(GSK)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入待测物质,再与HRP标记的待测物质抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。
糖原合成酶激酶(GSK)ELISA试剂盒操作步骤
    1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。
    2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
    3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。
    4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
    5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
    6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。
    7、温育:重复4的操作。
    8、洗板:重复5的操作。
    9、显色:每孔先加入显色剂A 液50μL,再加入显色剂B液 50μL,37℃避光显色15min。
   10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
   11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
   12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。*终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

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