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碳酸酐酶9(CA9)ELISA试剂盒操作流程与保存需考虑的问题

碳酸酐酶9(CA9)ELISA试剂盒操作流程: 
    1. 碳酸酐酶9(CA9)ELISA试剂盒从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
    2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
    3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
    4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
    5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
    6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
    7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
碳酸酐酶9(CA9)ELISA试剂盒保存方面要考虑以下几个方面:
    (1)要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团,其有类似过氧化物的活性,因此,在以HRP为标记酶的ELISA测定中,如血清标本中血红蛋白浓度较高,则其就很容易在温育过程中吸附于固相,从而与后面加入的HRP底物反应显色。
    (2)样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染,一则细菌的生长,其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用;二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。
    (3)碳酸酐酶9(CA9)ELISA试剂盒血清标本如是以无菌操作分离,则可以在2~8℃下保存一周,如为有菌操作,则建议冰冻保存。样本的长时间保存,应在-70℃以下。
    (4)冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,从而引起假阴性结果。此外,冻融标本的混匀亦应注意,不要进行剧烈振荡,反复颠倒混匀即可。
    (5)标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时,应离心沉淀后取上清检测。

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