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免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒实验步骤及标本的处理与性能简述
免疫球蛋白M(IgM)Elisa试剂盒实验步骤
1、用缓冲液将
抗体
稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。
2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体:在各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4、加底物液显色:在各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5、终止反应:在每孔中加入1滴终止液混匀
6、结果判定:在450mm处测光值,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在人免疫球蛋白M(IgM)ELISA 检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
免疫球蛋白M(IgM)Elisa试剂盒标本的处理:
(1)细胞培养上清液
根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品,然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是稀释5倍。
(2)脑脊液
根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品,然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是5倍。
(3)血浆
①用EDTA2K离心收集在真空血液收集管中的血液,5,000×g,15分钟,4℃,分离血浆样品,然后储存在零下80℃直到使用。
②用试剂盒中的标准稀释液5倍稀释血浆以避免血浆中的干扰物质影响检测,按照说明书指定方法检测。
免疫球蛋白M(IgM)Elisa试剂盒性能:
1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2.灵敏度:*低检测浓度小于10 pg/ml。
3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
有效期:6个月
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