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麦角蛋白IgA(Gliadin-IgA)ELISA试剂盒样本的处理方式及检测方法的介绍
麦角蛋白iga(gliadin-iga)elisa试剂盒样本的处理方式:
1、胃液、唾液、尿液的采集方式一般现采现用,胃液、唾液*好的采集时间是空腹采集,一般隔夜尿不采集;
2、采集血清时,一般要加入总体积1%的抗凝剂,采集后先室温或4℃静置半小时后,800-1000rmpx5min分离,取上清,-20℃或4℃保存备用;
3、组织提取液、肺泡灌洗液等,采集后离心分离,800-1000rmpx5min,取上清,-20℃或4℃保存备用;
4、采集血浆时一般不加抗凝剂,采集后立即离心800-1000rmpx5min分离,取上清,-20℃或4℃保存备用;
5、不贴壁细胞(分泌性蛋白),将培养基和细胞转移至10ml离心管,500-800rmpx10min,吸取上清至另一10ml离心管中,10000rmpx10min,-20℃或4℃保存,作为标本进行检测,如有需要可进行透析或纯化处理。
麦角蛋白IgA(Gliadin-IgA)ELI
SA试剂盒
用于检测未知抗原的双
抗体
夹心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
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